小肽矿物螯合物——纯植物蛋白小分子肽微量元素螯合物

小肽微量元素螯合物简介

第一部分:微量元素添加剂的历史

根据微量元素添加剂的发展历程,可以将其分为四代:

第一代:微量元素无机盐,如硫酸铜、硫酸亚铁、氧化锌等;第二代:微量元素有机酸盐,如乳酸亚铁、富马酸亚铁、柠檬酸铜等;第三代:微量元素氨基酸螯合饲料级盐,如蛋氨酸锌、甘氨酸铁、甘氨酸锌;第四代:微量元素蛋白质盐和小肽螯合盐,如蛋白质铜、蛋白质铁、蛋白质锌、蛋白质锰、小肽铜、小肽铁、小肽锌、小肽锰等。

第一代是无机微量元素,第二代至第四代是有机微量元素。

第二部分:为什么选择小肽螯合物

小肽螯合物具有以下功效:

1. 小肽与金属离子螯合时,其形式丰富且难以饱和;

2. 它不与氨基酸通道竞争,具有更多的吸收位点和更快的吸收速度;

3. 能源消耗更少;4. 储存量更多,利用率更高,动物生产性能大大提高;

5. 抗菌和抗氧化;

6. 免疫调节。

大量研究表明,小肽螯合物的上述特性或作用使其具有广阔的应用前景和发展潜力,因此我公司最终决定将小肽螯合物作为公司有机微量矿物质产品研发的重点。

第三部分 小肽螯合物的功效

1.肽、氨基酸和蛋白质之间的关系

什么是肽?

蛋白质的分子量超过10000;

肽的分子量为150~10000;

小肽,又称小分子肽,由 2~4 个氨基酸组成;

氨基酸的平均分子量约为150。

2. 与金属螯合的氨基酸和肽的配位基团

金属螯合的氨基酸和肽的配位基团

(1)氨基酸中的配位基团

金属螯合的氨基酸和肽的配位基团

氨基酸中的配位基团:

α-碳上的氨基和羧基;

某些α-氨基酸的侧链基团,例如半胱氨酸的巯基、酪氨酸的酚羟基和组氨酸的咪唑基。

金属螯合的氨基酸和肽的配位基团

(2)小肽中的配位基团

金属螯合的氨基酸和肽的配位基团

小肽比氨基酸具有更多的配位基团。当它们与金属离子螯合时,更容易发生螯合,并且可以形成多齿螯合,这使得螯合物更加稳定。

3. 小肽螯合物的功效

小肽促进微量元素吸收的理论基础

小肽的吸收特性是促进微量元素吸收的理论基础。根据传统的蛋白质代谢理论,动物对蛋白质的需求量与对各种氨基酸的需求量相同。然而,近年来研究表明,不同来源饲料中氨基酸的利用率存在差异,当动物饲喂单一蛋白或低蛋白氨基酸平衡日粮时,无法获得最佳生产性能(Baker,1977;Pinchasov等,1990)[2,3]。因此,一些学者提出,动物对完整蛋白质本身或相关肽具有特殊的吸收能力。Agar(1953)[4]首次观察到肠道可以完全吸收和转运二缩水甘油。此后,研究人员提出了小肽可以被完全吸收的有力论据,证实了完整甘氨酰甘氨酸的转运和吸收;大量小肽可以以肽的形式直接被吸收进入体循环。 Hara 等人 (1984)[5] 也指出,蛋白质在消化道中的消化终产物主要是小肽,而不是游离氨基酸 (FAA)。小肽可以完全穿过肠黏膜细胞进入体循环 (Le Guowei, 1996)[6]。

促进微量元素吸收的小肽的研究进展,乔伟等。

小肽螯合物以小肽的形式被运输和吸收。

根据小肽的吸收和转运机制及特性,以小肽为主要配体的微量元素螯合物可以整体转运,更有利于提高微量元素的生物活性。(乔伟等)

小肽螯合物的功效

1. 小肽与金属离子螯合时,其形式丰富且难以饱和;

2. 它不与氨基酸通道竞争,具有更多的吸收位点和更快的吸收速度;

3. 能源消耗更少;

4. 存款更多,利用率更高,动物生产性能大大提高;

5. 抗菌和抗氧化;6. 免疫调节。

4. 对肽的进一步了解

4. 对肽的进一步了解
进一步了解肽

这两种肽类药物,哪一种性价比更高?

  • 结合肽
  • 磷酸肽
  • 相关试剂
  • 抗菌肽
  • 免疫肽
  • 神经肽
  • 激素肽
  • 抗氧化肽
  • 营养肽
  • 调味肽

(1)肽的分类

结合肽、磷酸肽、相关试剂、抗菌肽、免疫肽、神经肽、激素肽、抗氧化肽、营养肽、调味肽

(2)肽的生理效应

  • 1. 调节体内水分和电解质的平衡;
  • 2. 产生对抗细菌和感染的抗体,增强免疫系统的免疫功能;
  • 3. 促进伤口愈合;快速修复上皮组织损伤。
  • 4. 体内产生的酶有助于将食物转化为能量;
  • 5. 修复细胞,改善细胞代谢,防止细胞退化,并在预防癌症中发挥作用;
  • 6.促进蛋白质和酶的合成与调节;
  • 7. 一种重要的化学信使,在细胞和器官之间传递信息;
  • 8. 预防心脑血管疾病;
  • 9.调节内分泌系统和神经系统。
  • 10. 改善消化系统,治疗慢性胃肠道疾病;
  • 11.改善糖尿病、风湿病、类风湿病等疾病。
  • 12. 抗病毒感染、抗衰老、清除体内过量自由基。
  • 13. 促进造血功能,治疗贫血,防止血小板聚集,从而提高血液红细胞的携氧能力。
  • 14. 直接对抗 DNA 病毒和靶向病毒细菌。

5. 小肽螯合物的双重营养功能

这种小肽螯合物以整体形式进入动物体内的细胞,然后自动断开螯合键在细胞内分解成肽和金属离子,分别被……利用动物发挥双重营养功能尤其是肽的功能作用。

小肽的功能

  • 1.促进动物肌肉组织中的蛋白质合成,减轻细胞凋亡,促进动物生长
  • 2.改善肠道菌群结构,促进肠道健康
  • 3.提供碳骨架,并提高肠道淀粉酶和蛋白酶等消化酶的活性。
  • 4.具有抗氧化应激作用
  • 5.具有抗炎特性
  • 6.……

6. 小肽螯合物相对于氨基酸螯合物的优势

氨基酸螯合微量元素 小肽螯合微量元素
原材料成本 单一氨基酸原料价格昂贵。 中国角蛋白原料丰富。畜牧业的毛发、蹄子和角,以及化工行业的蛋白质废水和皮革废料,都是优质且价格低廉的蛋白质原料。
吸收效应 氨基和羧基同时参与氨基酸和金属元素的螯合,形成类似于二肽的双环内源性大麻素结构,其中不含游离羧基,只能通过寡肽系统吸收。(苏春阳等,2002) 当小肽参与螯合时,末端氨基和相邻肽键氧通常形成单环螯合结构,螯合物保留一个游离羧基,可通过二肽体系吸收,其吸收强度比寡肽体系高得多。
稳定 具有一个或多个五元环或六元环的氨基、羧基、咪唑基、酚基和巯基的金属离子。 除了氨基酸已有的五种配位基团外,小肽中的羰基和亚氨基也能参与配位,因此小肽螯合物比氨基酸螯合物更稳定。(杨品等,2002)

7. 小肽螯合物相对于乙醇酸和蛋氨酸螯合物的优势

甘氨酸螯合微量元素 蛋氨酸螯合微量元素 小肽螯合微量元素
协调表 甘氨酸的羧基和氨基可以与金属离子配位。 蛋氨酸的羧基和氨基可以与金属离子配位。 当与金属离子螯合时,它具有丰富的配位形式,不易饱和。
营养功能 氨基酸的种类和功能是单一的。 氨基酸的种类和功能是单一的。 丰富多样氨基酸提供更全面的营养,而小肽则可以发挥相应的作用。
吸收效应 甘氨酸螯合物有no存在游离羧基,吸收缓慢。 蛋氨酸螯合物有no存在游离羧基,吸收缓慢。 形成的小肽螯合物包含含有游离羧基,具有快速吸收效果。

第四部分 商品名“小肽-矿物质螯合物”

顾名思义,小肽-矿物质螯合物很容易螯合。

这意味着小肽配体由于配位基团数量多而不易饱和,易于与金属元素形成多齿螯合物,具有良好的稳定性。

第五部分 小肽-矿物螯合物系列产品简介

1. 小肽微量元素螯合铜(商品名:饲料级氨基酸螯合铜)

2. 小肽微量元素螯合铁(商品名:饲料级亚铁氨基酸螯合物)

3. 小肽微量元素螯合锌(商品名:饲料级氨基酸螯合锌)

4. 小肽微量元素螯合锰(商品名:饲料级氨基酸螯合锰)

铜氨基酸螯合物饲料级

铜氨基酸螯合物饲料级

饲料级亚铁氨基酸螯合物

饲料级亚铁氨基酸螯合物

锌氨基酸螯合物饲料级

锌氨基酸螯合物饲料级

饲料级锰氨基酸螯合物

饲料级锰氨基酸螯合物

铜氨基酸螯合物饲料级
小肽-矿物螯合物系列产品简介

1. 铜氨基酸螯合物饲料级

  • 产品名称:饲料级铜氨基酸螯合物
  • 外观:棕绿色颗粒
  • 理化参数

a) 铜:≥ 10.0%

b) 总氨基酸:≥ 20.0%

c) 螯合率:≥ 95%

d) 砷:≤ 2 mg/kg

e) 铅:≤ 5 mg/kg

f) 镉:≤ 5 mg/kg

g) 水分含量:≤ 5.0%

h) 细度:所有颗粒均可通过 20 目筛,主要粒径为 60-80 目。

n=0,1,2,... 表示二肽、三肽和四肽的螯合铜。

肽键,又称酰胺键

二甘油

小肽螯合物的结构

小肽-矿物螯合物系列产品简介

铜氨基酸螯合物饲料级特性

  • 本产品是一种全有机微量元素,采用特殊的螯合工艺,以纯植物酶促小分子肽为螯合底物,并添加微量元素而制成。
  • 该产品化学性质稳定,可显著降低对维生素、脂肪等物质的损害。
  • 使用本产品有利于提高饲料品质。本产品通过小肽和氨基酸途径吸收,减少了与其他微量元素的竞争和拮抗作用,具有最佳的生物吸收和利用率。
  • 铜是红细胞、结缔组织、骨骼的主要成分,参与体内多种酶的合成,增强机体免疫功能,具有抗菌作用,能增加日增重,提高饲料转化率。

铜氨基酸螯合物饲料级的用途和功效

应用程序对象 建议用量(克/吨全价值材料) 全价饲料中的含量(毫克/千克) 功效
母猪 400~700 60~105 1. 提高母猪的繁殖性能和利用年限;

2. 提高胎儿和仔猪的活力;

3. 提高免疫力和对疾病的抵抗力。

小猪 300~600 45~90 1. 有利于改善造血和免疫功能,增强抗压能力和抗病能力;

2. 提高生长速度并显著提高饲料转化率。

育肥猪 125 1月18.5日
125 1月18.5日 1. 提高抗逆性,降低死亡率;

2. 提高饲料补偿率,提高生长速度。

水生动物 鱼 40~70 6~10.5 1. 促进生长,提高饲料补偿;

2. 抗应激,降低发病率和死亡率。

虾 150~200 22.5~30
反刍动物每日每头体重(克/头) 1月 0.75   1. 预防胫骨关节变形、“凹背”运动障碍、摇晃、心肌损伤;

2. 防止毛发或皮毛角化、变硬、失去正常卷曲度,防止眼圈出现“灰斑”;

3. 防止体重减轻、腹泻、产奶量减少。

饲料级亚铁氨基酸螯合物
小肽-矿物螯合物系列产品简介

2. 亚铁氨基酸螯合物饲料级

  • 产品名称:饲料级亚铁氨基酸螯合物
  • 外观:棕绿色颗粒
  • 理化参数

a) 铁:≥ 10.0%

b) 总氨基酸:≥ 19.0%

c) 螯合率:≥ 95%

d) 砷:≤ 2 mg/kg

e) 铅:≤ 5 mg/kg

f) 镉:≤ 5 mg/kg

g) 水分含量:≤ 5.0%

h) 细度:所有颗粒均可通过 20 目筛,主要粒径为 60-80 目。

n=0,1,2,...表示二肽、三肽和四肽的螯合锌。

亚铁氨基酸螯合物饲料级的特性

  • 本产品是一种有机微量矿物质,采用特殊的螯合工艺,以纯植物酶促小分子肽为螯合底物,并添加微量元素进行螯合;
  • 本产品化学性质稳定,能显著降低对维生素、脂肪等成分的破坏。使用本产品有利于提高饲料品质;
  • 该产品通过小肽和氨基酸途径吸收,减少了与其他微量元素的竞争和拮抗作用,具有最佳的生物吸收和利用率;
  • 本产品能穿过胎盘和乳腺屏障,使胎儿更健康,增加出生体重和断奶体重,降低死亡率;铁是血红蛋白和肌红蛋白的重要组成部分,能有效预防缺铁性贫血及其并发症。

亚铁氨基酸螯合物饲料级的用途和功效

应用程序对象 建议剂量

(克/吨全价值材料)

全价饲料中的含量(毫克/千克) 功效
母猪 300~800 45~120 1. 提高母猪的繁殖性能和利用寿命;

2. 提高仔猪的出生体重、断奶体重和均匀度,以利于后期生产性能;

3. 提高哺乳猪体内铁的储存量和乳汁中的铁浓度,以预防哺乳猪缺铁性贫血。

仔猪和育肥猪 小猪300~600 45~90 1. 提高仔猪的免疫力,增强其抗病能力,提高其存活率;

2. 提高生长速度,改善饲料转化率,增加断奶仔猪体重和均匀度,降低患病猪的发生率;

3. 提高肌红蛋白和肌红蛋白水平,预防和治疗缺铁性贫血,使猪皮红润,明显改善肉色。

育肥猪 200~400 30~60
300~400 45~60 1. 提高饲料转化率,提高生长速度,提高抗应激能力,降低死亡率;

2. 提高产蛋率,降低破蛋率,加深蛋黄颜色;

3. 提高种蛋的受精率和孵化率以及幼禽的成活率。

水生动物 200~300 30~45 1. 促进生长,提高饲料转化率;

2. 提高抗应激能力,降低发病率和死亡率。

锌氨基酸螯合物饲料级
小肽-矿物螯合物系列产品简介

3. 锌氨基酸螯合物饲料级

  • 产品名称:饲料级锌氨基酸螯合物
  • 外观:棕黄色颗粒
  • 理化参数

a) 锌:≥ 10.0%

b) 总氨基酸:≥ 20.5%

c) 螯合率:≥ 95%

d) 砷:≤ 2 mg/kg

e) 铅:≤ 5 mg/kg

f) 镉:≤ 5 mg/kg

g) 水分含量:≤ 5.0%

h) 细度:所有颗粒均可通过 20 目筛,主要粒径为 60-80 目。

n=0,1,2,...表示二肽、三肽和四肽的螯合锌。

锌氨基酸螯合物饲料级特性

本产品是一种全有机微量矿物质,采用特殊的螯合工艺,以纯植物酶促小分子肽为螯合底物,并添加微量元素进行螯合;

该产品化学性质稳定,可显著降低对维生素、脂肪等物质的损害。

使用本产品有利于提高饲料品质;本产品通过小肽和氨基酸途径吸收,减少与其他微量元素的竞争和拮抗作用,具有最佳的生物吸收和利用率;

本产品能增强免疫力,促进生长,提高饲料转化率,改善毛发光泽;

锌是200多种酶、上皮组织、核糖和味觉抑制素的重要组成部分。它能促进舌黏膜味蕾细胞的快速增殖并调节食欲;抑制有害肠道细菌;具有抗菌作用,可以改善消化系统的分泌功能和组织细胞中酶的活性。

锌氨基酸螯合物饲料级的用途和功效

应用程序对象 建议剂量

(克/吨全价值材料)

全价饲料中的含量(毫克/千克) 功效
怀孕和哺乳期的母猪 300~500 45~75 1. 提高母猪的繁殖性能和利用寿命;

2. 提高胎儿和仔猪的活力,增强其抗病能力,使其在后期具有更好的生产性能;

3. 改善怀孕母猪的身体状况和仔猪的出生体重。

哺乳仔猪、仔猪和育肥猪 250~400 37.5~60 1. 提高仔猪免疫力,减少腹泻和死亡率;

2. 提高适口性,增加采食量,提高生长速度,提高饲料转化率;

3. 使猪毛光亮,提高胴体品质和肉质。

300~400 45~60 1. 提高羽毛光泽度;

2.提高种蛋的产蛋率、受精率和孵化率,增强蛋黄的着色能力;

3. 提高抗应激能力,降低死亡率;

4. 提高饲料转化率,提高生长速度。

水生动物 1月300 45 1. 促进生长,提高饲料转化率;

2. 提高抗应激能力,降低发病率和死亡率。

反刍动物每日每头体重(克/头) 2.4   1. 提高产奶量,预防乳腺炎和蹄腐病,降低牛奶中的体细胞含量;

2. 促进生长,提高饲料转化率,提高肉质。

饲料级锰氨基酸螯合物
小肽-矿物螯合物系列产品简介

4. 饲料级锰氨基酸螯合物

  • 产品名称:饲料级锰氨基酸螯合物
  • 外观:棕黄色颗粒
  • 理化参数

a) 锰:≥ 10.0%

b) 总氨基酸:≥ 19.5%

c) 螯合率:≥ 95%

d) 砷:≤ 2 mg/kg

e) 铅:≤ 5 mg/kg

f) 镉:≤ 5 mg/kg

g) 水分含量:≤ 5.0%

h) 细度:所有颗粒均可通过 20 目筛,主要粒径为 60-80 目。

n=0, 1,2,...表示二肽、三肽和四肽的螯合锰。

锰氨基酸螯合物饲料级特性

本产品是一种全有机微量矿物质,采用特殊的螯合工艺,以纯植物酶促小分子肽为螯合底物,并添加微量元素进行螯合;

本产品化学性质稳定,能显著降低对维生素、脂肪等成分的破坏。使用本产品有利于提高饲料品质;

该产品通过小肽和氨基酸途径吸收,减少了与其他微量元素的竞争和拮抗作用,具有最佳的生物吸收和利用率;

该产品能显著提高生长速度、饲料转化率和健康状况;并能明显提高种禽的产蛋率、孵化率和健康雏鸡率;

锰是骨骼生长和结缔组织维持所必需的元素。它与多种酶密切相关,并参与碳水化合物、脂肪和蛋白质代谢、生殖和免疫反应。

锰氨基酸螯合物饲料级的用途和功效

应用程序对象 建议用量(克/吨全价值材料) 全价饲料中的含量(毫克/千克) 功效
种猪 200~300 30~45 1.促进性器官正常发育,提高精子活力;

2. 提高种猪的繁殖能力,减少繁殖障碍。

仔猪和育肥猪 100~250 15~37.5 1. 有利于提高免疫功能,增强抗应激能力和抵抗疾病能力;

2. 显著促进生长并提高饲料转化率;

3. 改善肉的颜色和品质,提高瘦肉率。

250~350 37.5~52.5 1. 提高抗应激能力,降低死亡率;

2. 提高产蛋率、受精率和种蛋孵化率,提高蛋壳质量,降低破壳率;

3. 促进骨骼生长,降低腿部疾病的发生率。

水生动物 100~200 15~30 1. 促进生长,提高抗逆性和抗病能力;

2. 提高精子活力和受精卵孵化率。

反刍动物每日每头体重(克/头) 牛 1.25   1. 预防脂肪酸合成紊乱和骨组织损伤;

2. 提高繁殖能力,预防母畜流产和产后瘫痪,降低犊羊死亡率,

并增加幼年动物的体重。

山羊 0.25  

第六部分 小肽-矿物螯合物的FAB

小肽-矿物螯合物的FAB
序列号 F:功能属性 A:竞争差异 B:竞争差异给用户带来的益处
1 原材料的选择性控制 选择纯植物酶水解小肽 生物安全性高,避免同类相食。
2 双蛋白生物酶定向消化技术 小分子肽含量高 更多不易饱和、具有高生物活性和更好稳定性的“靶点”。
3 先进的压力喷涂和干燥技术 颗粒状产品,粒径均匀,流动性好,不易吸湿 确保全价饲料易于使用,混合更均匀
低水分含量(≤5%),大大降低了维生素和酶制剂的影响。 提高饲料产品的稳定性
4 先进的生产控制技术 全封闭式工艺,高度自动化控制 安全稳定的质量
5 先进的质量控制技术 建立和完善科学先进的分析方法和控制手段,用于检测影响产品质量的因素,例如酸溶性蛋白质、分子量分布、氨基酸和螯合率等。 确保质量,确保效率,提高效率

第七部分:竞争对手比较

标准版与标准版

3. 竞争对手比较
1. 竞争对手比较
1. 竞争对手比较

肽分布和产品螯合率的比较

Sustar的产品 小肽(180-500)的比例 Zinpro的产品 小肽(180-500)的比例
AA-Cu ≥74% AVAILA-Cu 78%
AA-Fe ≥48% AVAILA-Fe 59%
AA-Mn ≥33% AVAILA-Mn 53%
AA-Zn ≥37% AVAILA-Zn 56%

 

Sustar的产品 螯合率 Zinpro的产品 螯合率
AA-Cu 94.8% AVAILA-Cu 94.8%
AA-Fe 95.3% AVAILA-Fe 93.5%
AA-Mn 94.6% AVAILA-Mn 94.6%
AA-Zn 97.7% AVAILA-Zn 90.6%

Sustar 的小肽比例略低于 Zinpro,而 Sustar 产品的螯合率略高于 Zinpro 的产品。

不同产品中17种氨基酸含量的比较

名称

氨基酸

Sustar 的铜

氨基酸螯合物

饲料级

Zinpro的

可用

Sustar 的亚铁氨基酸 C

赫拉特饲料

年级

Zinpro 的 AVAILA

Sustar 的锰

氨基酸螯合物

饲料级

Zinpro 的 AVAILA

Sustar 的锌

氨基酸

螯合饲料级

Zinpro 的 AVAILA

天冬氨酸(%) 1.88 0.72 1.50 0.56 1.78 1.47 1.80 2.09
谷氨酸(%) 4.08 6.03 4.23 5.52 4.22 5.01 4.35 3.19
丝氨酸(%) 0.86 0.41 1.08 0.19 1.05 0.91 1.03 2.81
组氨酸(%) 0.56 0.00 0.68 0.13 0.64 0.42 0.61 0.00
甘氨酸(%) 1.96 4.07 1.34 2.49 1.21 0.55 1.32 2.69
苏氨酸(%) 0.81 0.00 1.16 0.00 0.88 0.59 1.24 1.11
精氨酸(%) 1.05 0.78 1.05 0.29 1.43 0.54 1.20 1.89
丙氨酸(%) 2.85 1.52 2.33 0.93 2.40 1.74 2.42 1.68
酪氨酸酶(%) 0.45 0.29 0.47 0.28 0.58 0.65 0.60 0.66
胱氨酸醇(%) 0.00 0.00 0.09 0.00 0.11 0.00 0.09 0.00
缬氨酸(%) 1.45 1.14 1.31 0.42 1.20 1.03 1.32 2.62
蛋氨酸(%) 0.35 0.27 0.72 0.65 0.67 0.43 1月 0.75 0.44
苯丙氨酸(%) 0.79 0.41 0.82 0.56 0.70 1.22 0.86 1.37
异亮氨酸(%) 0.87 0.55 0.83 0.33 0.86 0.83 0.87 1.32
亮氨酸(%) 2.16 0.90 2.00 1.43 1.84 3.29 2.19 2.20
赖氨酸(%) 0.67 2.67 0.62 1.65 0.81 0.29 0.79 0.62
脯氨酸(%) 2.43 1.65 1.98 0.73 1.88 1.81 2.43 2.78
总氨基酸(%) 23.2 21.4 22.2 16.1 22.3 20.8 23.9 27.5

总体而言,Sustar 产品中的氨基酸比例高于 Zinpro 产品中的氨基酸比例。

第八部分 使用效果

不同来源的微量元素对产蛋后期蛋鸡生产性能和蛋品质的影响

不同来源的微量元素对产蛋后期蛋鸡生产性能和蛋品质的影响

生产过程

生产过程
  • 靶向螯合技术
  • 剪切乳化技术
  • 压力喷涂和干燥技术
  • 制冷与除湿技术
  • 先进的环境控制技术

附录A:肽相对分子质量分布的测定方法

采用标准:GB/T 22492-2008

1. 测试原则:

采用高效凝胶过滤色谱法测定。具体而言,以多孔填料为固定相,基于样品组分相对分子质量大小的差异进行分离,在220nm紫外吸收波长下检测肽键,利用凝胶过滤色谱法测定相对分子质量分布的专用数据处理软件(即GPC软件),对色谱图及其数据进行处理和计算,得到大豆肽的相对分子质量及其分布范围。

2. 试剂

实验用水应符合GB/T6682中二级水的规定,所用试剂除特殊规定外,应为分析纯。

2.1 试剂包括乙腈(色谱纯)、三氟乙酸(色谱纯),

2.2 用于相对分子质量分布校准曲线的标准物质:胰岛素、肌肽、甘氨酸-甘氨酸-酪氨酸-精氨酸、甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸

3 仪器和设备

3.1 高效液相色谱仪(HPLC):一种色谱工作站或积分仪,配有紫外检测器和 GPC 数据处理软件。

3.2 流动相真空过滤和脱气装置。

3.3 电子天平:刻度值为 0.000 1g。

4. 操作步骤

4.1 色谱条件和系统适应性实验(参考条件)

4.1.1 色谱柱:TSKgelG2000swxl300 mm×7.8 mm(内径)或其他同类型、性能相近的凝胶柱,适用于测定蛋白质和肽。

4.1.2 流动相:乙腈+水+三氟乙酸=20+80+0.1。

4.1.3 检测波长:220 nm。

4.1.4 流速:0.5 mL/min。

4.1.5 检测时间:30 分钟。

4.1.6 样品进样量:20μL。

4.1.7 色谱柱温度:室温。

4.1.8 为了使色谱系统满足检测要求,规定在上述色谱条件下,凝胶色谱柱效率,即理论塔板数(N),根据三肽标准品(甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸)的峰计算,不小于10000。

4.2 相对分子质量标准曲线的制备

将上述不同相对分子质量的肽标准溶液(质量浓度均为1 mg/mL)通过流动相匹配配制,按一定比例混合,然后经孔径为0.2 μm~0.5 μm的有机相滤膜过滤后注入样品中,得到标准品的色谱图。通过绘制相对分子质量的对数与保留时间的关系图或进行线性回归,得到相对分子质量校准曲线及其方程。

4.3 样品处理

准确称取 10mg 样品于 10mL 容量瓶中,加入少量流动相,超声振荡 10min,使样品充分溶解混合,用流动相稀释至刻度,然后用孔径为 0.2μm~0.5μm 的有机相膜过滤,滤液按 A.4.1 中的色谱条件进行分析。

5. 相对分子质量分布的计算

在4.1的色谱条件下分析4.3中制备的样品溶液后,利用GPC数据处理软件,将样品色谱数据代入校准曲线4.2,即可得到样品的相对分子质量及其分布范围。不同肽段的相对分子质量分布可通过峰面积归一化法计算,公式为:X=A/Atotal×100

公式中:X - 样品中相对分子质量肽在总肽中的质量分数,%;

A - 相对分子质量肽的峰面积;

总 A 值 - 各相对分子质量肽峰面积之和,计算至小数点后一位。

6. 重复性

在可重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过两次测定结果算术平均值的 15%。

附录B:游离氨基酸的测定方法

标准采纳:Q/320205 KAVN05-2016

1.2 试剂和材料

冰醋酸:分析纯

高氯酸:0.0500 mol/L

指示剂:0.1%结晶紫指示剂(冰醋酸)

2. 游离氨基酸的测定

样品在 80°C 下干燥 1 小时。

将样品放入干燥容器中,使其自然冷却至室温或冷却至可用温度。

将约 0.1 克样品(精确到 0.001 克)称入 250 毫升干燥的锥形瓶中。

尽快进行下一步,以免样品吸收环境水分。

加入 25 毫升冰醋酸,搅拌均匀,搅拌时间不超过 5 分钟。

加入2滴结晶紫指示剂

用 0.0500 mol / L (±0.001) 高氯酸标准滴定溶液进行滴定,直至溶液颜色由紫色变为终点。

记录消耗的标准溶液的体积。

同时进行空白试验。

3. 计算和结果

试剂中游离氨基酸含量 X 以质量分数 (%) 表示,并根据以下公式计算:X = C × (V1-V0) × 0.1445/M × 100%,公式如下:

C - 标准高氯酸溶液的浓度,单位为摩尔每升 (mol/L)

V1 - 用标准高氯酸溶液滴定样品所用的体积,以毫升 (mL) 为单位。

Vo - 用标准高氯酸溶液进行滴定空白所用的体积,单位为毫升(mL);

M - 样品的质量,以克 (g) 为单位。

0.1445:相当于 1.00 mL 标准高氯酸溶液 [c (HClO4) = 1.000 mol / L] 的氨基酸的平均质量。

附录C:测定Sustar螯合率的方法

标准采纳:Q/70920556 71-2024

1. 测定原理(以铁为例)

氨基酸铁络合物在无水乙醇中的溶解度很低,而游离金属离子可溶于无水乙醇,利用二者在无水乙醇中的溶解度差异来确定氨基酸铁络合物的螯合率。

2. 试剂和溶液

无水乙醇;其余与GB/T 27983-2011第4.5.2条相同。

3. 分析步骤

同时进行两组试验。称取0.1g在103±2℃下干燥1小时的样品(精确至0.0001g),加入100mL无水乙醇溶解,过滤,滤渣用100mL无水乙醇洗涤至少三次,然后将滤渣转移至250mL锥形瓶中,按照GB/T27983-2011标准4.5.3条的规定加入10mL硫酸溶液,然后按照GB/T27983-2011标准4.5.3条的规定进行后续步骤“加热溶解,然后冷却”。同时进行空白试验。

4. 总铁含量的测定

4.1 确定原则与 GB/T 21996-2008 中的第 4.4.1 条相同。

4.2 试剂和溶液

4.2.1 混合酸:将 150 毫升硫酸和 150 毫升磷酸加入 700 毫升水中,充分混合。

4.2.2 二苯胺磺酸钠指示剂溶液:5g/L,按GB/T603制备。

4.2.3 硫酸铈标准滴定溶液:浓度 c [Ce (SO4) 2] = 0.1 mol/L,按 GB/T601 制备。

4.3 分析步骤

同时进行两组平行试验。称取0.1g样品(精确至0.20001g),置于250mL锥形瓶中,加入10mL混合酸,溶解后,加入30mL水和4滴二苯胺磺酸钠指示剂溶液,然后按照GB/T21996-2008标准4.4.2条进行后续步骤。同时进行空白试验。

4.4 结果的表示

氨基酸铁复合物的总铁含量 X1(以铁的质量分数表示,%)按公式(1)计算:

X1=(V-V0)×C×M×10-3×100

公式中:V - 滴定试验溶液所消耗的硫酸铈标准溶液的体积,mL;

V0 - 用于滴定空白溶液的硫酸铈标准溶液的消耗量,mL;

C - 硫酸铈标准溶液的实际浓度,mol/L

5. 螯合物中铁含量的计算

螯合物中铁含量 X2(以铁的质量分数表示,%)按以下公式计算:x2 = ((V1-V2) × C × 0.05585)/m1 × 100

公式中:V1 - 滴定试验溶液所消耗的硫酸铈标准溶液的体积,mL;

V2 - 用于滴定空白溶液的硫酸铈标准溶液消耗量,mL;

C - 硫酸铈标准溶液的实际浓度,mol/L;

0.05585 - 亚铁离子的质量以克表示,相当于 1.00 mL 硫酸铈标准溶液 C[Ce(SO4)2.4H20] = 1.000 mol/L。

m1-样品的质量,g。取平行测定结果的算术平均值作为测定结果,平行测定结果的绝对差值不超过0.3%。

6. 螯合率的计算

螯合率 X3,以百分比表示的值 X3 = X2/X1 × 100

附录C:测定Zinpro螯合率的方法

标准采纳:Q/320205 KAVNO7-2016

1. 试剂和材料

a) 冰醋酸:分析纯;b) 高氯酸:0.0500mol/L;c) 指示剂:0.1% 结晶紫指示剂(冰醋酸)

2. 游离氨基酸的测定

2.1 将样品在 80°C 下干燥 1 小时。

2.2 将样品放入干燥的容器中,使其自然冷却至室温或冷却至可用温度。

2.3 称取约 0.1 g 样品(精确到 0.001 g)于 250 mL 干燥锥形瓶中。

2.4 迅速进行下一步,以避免样品吸收环境水分。

2.5 加入 25 毫升冰醋酸,搅拌均匀,搅拌时间不超过 5 分钟。

2.6 加入 2 滴结晶紫指示剂。

2.7 用 0.0500mol/L (±0.001) 高氯酸标准滴定溶液滴定,直至溶液颜色由紫色变为绿色,持续 15 秒,且不再变化,即为滴定终点。

2.8 记录消耗的标准溶液的体积。

2.9 同时进行空白试验。

3. 计算和结果

试剂中游离氨基酸含量 X 以质量分数 (%) 表示,按公式 (1) 计算: X=C×(V1-V0) ×0.1445/M×100%...... .......(1)

公式中:C - 标准高氯酸溶液的浓度,单位为摩尔每升(mol/L)

V1 - 用标准高氯酸溶液滴定样品所用的体积,以毫升 (mL) 为单位。

Vo - 用标准高氯酸溶液进行滴定空白所用的体积,单位为毫升(mL);

M - 样品的质量,以克 (g) 为单位。

0.1445 - 相当于 1.00 mL 标准高氯酸溶液 [c (HClO4) = 1.000 mol / L] 的氨基酸平均质量。

4. 螯合率的计算

样品的螯合率以质量分数(%)表示,根据公式(2)计算:螯合率 =(总氨基酸含量 - 游离氨基酸含量)/总氨基酸含量×100%。


发布时间:2025年9月17日