小肽微量矿物质螯合物简介
第 1 部分 微量矿物质添加剂的历史
按微量矿物质添加剂的发展可分为四代：
第一代：微量矿物质无机盐，如硫酸铜、硫酸亚铁、氧化锌等；第二代：微量矿物质有机酸盐，如乳酸亚铁、富马酸亚铁、柠檬酸铜等；第三代：氨基酸螯合饲料级微量矿物质，如蛋氨酸锌、甘氨酸铁、甘氨酸锌等；第四代：微量矿物质蛋白盐和小肽螯合盐，如蛋白铜、蛋白铁、蛋白锌、蛋白锰、小肽铜、小肽铁、小肽锌、小肽锰等。
第一代为无机微量矿物质，第二代至第四代为有机微量矿物质。
第 2 部分 为什么选择小肽螯合物
小肽螯合物具有以下功效：
1、小肽与金属离子螯合时，形态丰富，不易饱和；
2、不与氨基酸通道竞争，吸收位点较多，吸收速度快；
3、能源消耗少； 4、沉积量多，利用率高，大大提高动物生产性能；
5、抗菌、抗氧化；
6.免疫调节。
大量研究表明，小肽螯合物的上述特性或功效使其具有广阔的应用前景和发展潜力，因此我公司最终决定将小肽螯合物作为公司有机微量矿物质产品研发的重点。
第三部分 小肽螯合物的功效
1.肽、氨基酸、蛋白质之间的关系
蛋白质分子量大于10000；
肽的分子量为150～10000；
小肽又称小分子肽，由2～4个氨基酸组成；
氨基酸的平均分子量约为150。
2. 与金属螯合的氨基酸和肽的配位基团
(1)氨基酸中的配位基团
氨基酸中的配位基团：
a-碳上的氨基和羧基；
一些α-氨基酸的侧链基团，如半胱氨酸的巯基、酪氨酸的酚基和组氨酸的咪唑基。
(2) 小肽中的配位基团
小肽比氨基酸具有更多的配位基团。它们与金属离子螯合时，更容易螯合，并能形成多齿螯合，使螯合物更加稳定。
3、小肽螯合物产品功效
小肽促进微量矿物质吸收的理论基础
小肽的吸收特性是促进微量元素吸收的理论基础。根据传统的蛋白质代谢理论，动物对蛋白质的需要就是对各种氨基酸的需要。但近年来的研究表明，不同来源的饲料中氨基酸的利用率不同，当动物采用纯合日粮或低蛋白氨基酸平衡日粮喂养时，不能获得最佳的生产性能(Baker，1977；Pinchasov等，1990)[2,3]。因此，有学者提出动物对完整蛋白质本身或相关肽具有特殊吸收能力的观点。琼脂(1953)[4]首先观察到肠道能完全吸收和运输二缩水甘油。此后，研究人员提出了令人信服的论点，即小肽可以被完全吸收，证实了完整的甘氨酰甘氨酸被运输和吸收；大量的小肽可以以肽的形式直接被吸收进入体循环。原等人。 (1984)[5]也指出蛋白质在消化道中的消化终产物大多是小肽而不是游离氨基酸(FAA)。小肽可以完全穿过肠粘膜细胞，进入体循环(乐国伟，1996)[6]。
促进微量矿物质吸收的小肽研究进展，乔伟，等。
小肽螯合物以小肽的形式运输和吸收
根据小肽的吸收转运机制和特点，以小肽为主要配体的微量矿物质螯合体可以整体运输，更有利于微量矿物质生物效价的提高。 (乔伟等)
小肽螯合物的功效
1、小肽与金属离子螯合时，形态丰富，不易饱和；
2、不与氨基酸通道竞争，吸收位点较多，吸收速度快；
3、能源消耗少；
4、沉积量多，利用率高，大大提高动物生产性能；
5、抗菌、抗氧化； 6.免疫调节。
4. 对肽的进一步认识
这两种肽用户中哪一种更划算？
- 结合肽
- 磷酸肽
- 相关试剂
- 抗菌肽
- 免疫肽
- 神经肽
- 激素肽
- 抗氧化肽
- 营养肽
- 调味肽
(一)肽的分类
(2)肽的生理作用
- 1、调节体内水、电解质平衡；
- 2、为免疫系统制造针对细菌和感染的抗体，提高免疫功能；
- 3、促进伤口愈合；快速修复上皮组织损伤。
- 4、体内制造酶有助于将食物转化为能量；
- 5、修复细胞，改善细胞代谢，防止细胞变性，起到防癌作用；
- 6、促进蛋白质和酶的合成和调节；
- 7、细胞和器官之间传递信息的重要化学信使；
- 8、预防心脑血管疾病；
- 9、调节内分泌和神经系统。
- 10、改善消化系统，治疗慢性胃肠道疾病；
- 11、改善糖尿病、风湿、类风湿等疾病。
- 12、抗病毒感染、抗衰老、消除体内多余自由基。
- 13、促进造血功能，治疗贫血，防止血小板聚集，可提高血红细胞的携氧能力。
- 14、直接对抗DNA病毒，针对病毒细菌。
5、小肽螯合物的双重营养功能
小肽螯合物在动物体内整体进入细胞，然后自动破坏螯合键在细胞内分解成肽和金属离子，分别被细胞利用动物发挥双重营养功能，尤其是肽的功能作用。
小肽的作用
- 1.促进动物肌肉组织蛋白质合成，减轻细胞凋亡，促进动物生长
- 2.改善肠道菌群结构，促进肠道健康
- 3.提供碳骨架，增加肠淀粉酶、蛋白酶等消化酶的活性
- 4.具有抗氧化应激作用
- 5.具有抗炎特性
- 6.……
6. 小肽螯合物相对于氨基酸螯合物的优点
| 氨基酸螯合微量矿物质 | 小肽螯合微量矿物质 | |
| 原材料成本 | 单一氨基酸原料价格昂贵 | 我国角蛋白原料丰富。畜牧业中的毛发、蹄、角和化工中的蛋白质废水、皮革下脚料等都是优质廉价的蛋白质原料。 |
| 吸收效果 | 氨基和羧基同时参与氨基酸和金属元素的螯合，形成类似于二肽的双环内源性大麻素结构，不存在游离羧基，只能通过寡肽系统吸收。 （苏春阳等，2002） | 小肽参与螯合时，一般由末端氨基与相邻肽键氧形成单环螯合结构，螯合物保留游离羧基，可通过二肽体系吸收，吸收强度比寡肽体系高得多。 |
| 稳定 | 具有一个或多个氨基、羧基、咪唑基、酚基、巯基的五元环或六元环的金属离子。 | 除了氨基酸现有的五个配位基团外，小肽中的羰基和亚氨基也可以参与配位，从而使小肽螯合物比氨基酸螯合物更稳定。（杨品等，2002） |
7. 小肽螯合物相对于乙醇酸和蛋氨酸螯合物的优点
| 甘氨酸螯合微量矿物质 | 蛋氨酸螯合微量矿物质 | 小肽螯合微量矿物质 | |
| 协调形式 | 甘氨酸的羧基和氨基可以与金属离子配位。 | 蛋氨酸的羧基和氨基可以与金属离子配位。 | 与金属离子螯合时，配位形式丰富，不易饱和。 |
| 营养功能 | 氨基酸的种类和功能单一。 | 氨基酸的种类和功能单一。 | 这品种丰富氨基酸提供更全面的营养，而小肽则可以发挥相应的作用。 |
| 吸收效果 | 甘氨酸螯合物有不存在游离羧基，吸收作用缓慢。 | 蛋氨酸螯合物有不存在游离羧基，吸收作用缓慢。 | 形成小肽螯合物包含游离羧基的存在，具有快速吸收作用。 |
第 4 部分 商品名“小肽矿物质螯合物”
小肽矿物质螯合物，顾名思义，很容易螯合。
意味着肽配体较小，由于配位基团较多，不易饱和，易与金属元素形成多齿螯合物，稳定性好。
第五部分 小肽矿物质螯合物系列产品介绍
1、小肽微量矿物质螯合铜（商品名：氨基酸螯合铜饲料级）
2、小肽微量矿物质螯合铁（商品名：Ferrous Amino Acid Chelate Feed Grade）
3、小肽微量矿物质螯合锌（商品名：饲料级氨基酸螯合锌）
4、小肽微量矿物质螯合锰（商品名：饲料级氨基酸螯合锰）
饲料级氨基酸螯合铜
饲料级亚铁氨基酸螯合物
饲料级氨基酸螯合锌
饲料级氨基酸螯合物锰
1.饲料级氨基酸螯合铜
- 产品名称：饲料级氨基酸螯合铜
- 外观：棕绿色颗粒
- 理化参数
a) 铜：≥10.0%
b) 氨基酸总量：≥20.0%
c) 螯合率：≥95%
d) 砷：≤2mg/kg
e) 铅：≤5毫克/千克
f) 镉：≤5毫克/千克
g) 水分含量：≤5.0%
h) 细度：颗粒全部通过20目，主要粒径60-80目
n=0,1,2,... 表示二肽、三肽和四肽的螯合铜
双甘油
小肽螯合物的结构
饲料级氨基酸螯合铜的特性
- 本品是以纯植物酶解小分子肽为螯合底物与微量元素，经特殊螯合工艺螯合而成的全有机微量矿物质。
- 本品化学性质稳定，可显着减少其对维生素、脂肪等的损害。
- 使用本产品有利于提高饲料品质。该产品通过小肽和氨基酸途径吸收，减少了与其他微量元素的竞争和拮抗，具有最佳的生物吸收和利用率。
- 铜是红细胞、结缔组织、骨骼的主要成分，参与体内多种酶的合成，增强机体的免疫功能，有抗菌作用，可增加日增重，提高饲料报酬。
饲料级氨基酸螯合铜的用途及功效
| 应用对象 | 建议用量（克/吨全值料） | 全价饲料中含量（mg/kg） | 功效 |
| 母猪 | 400～700 | 60～105 | 1、提高母猪的繁殖性能和利用年限； 2、增加胎儿和仔猪的活力； 3、提高免疫力和抗病能力。 |
| 小猪 | 300～600 | 45～90 | 1、有利于提高造血和免疫功能，增强抗应激能力和抗病能力； 2、提高生长速度，显着提高饲料效率。 |
| 育肥猪 | 125 | 1月18.5日 | |
| 鸟 | 125 | 1月18.5日 | 1、提高抗逆能力，降低死亡率； 2、提高饲料补偿，提高生长速度。 |
| 水生动物 | 鱼 40～70 | 6～10.5 | 1、促进生长，提高饲料补偿； 2.抗应激，降低发病率和死亡率。 |
| 虾 150～200 | 22.5～30 | ||
| 反刍动物克/头日 | 一月 0.75 | 1、防止胫骨关节变形、“凹背”运动障碍、摇晃、心肌损伤； 2、防止毛发或被毛角化，变硬，失去正常的弧度，防止眼圈出现“灰斑”； 3.防止体重减轻、腹泻、产奶量减少。 |
2. 饲料级亚铁氨基酸螯合物
- 产品名称： 饲料级氨基酸亚铁螯合物
- 外观：棕绿色颗粒
- 理化参数
a) 铁：≥10.0%
b) 氨基酸总量：≥19.0%
c) 螯合率：≥95%
d) 砷：≤2mg/kg
e) 铅：≤5毫克/千克
f) 镉：≤5毫克/千克
g) 水分含量：≤5.0%
h) 细度：颗粒全部通过20目，主要粒径60-80目
n=0,1,2,...表示二肽、三肽和四肽的螯合锌
氨基酸亚铁螯合物饲料级的特性
- 本品是以纯植物酶解小分子肽为螯合底物与微量元素，经特殊螯合工艺螯合而成的有机微量矿物质；
- 本品化学性质稳定，可显着减少其对维生素、脂肪等的损害，使用本品有利于提高饲料品质；
- 产品通过小肽和氨基酸途径吸收，减少了与其他微量元素的竞争和拮抗，具有最佳的生物吸收利用率；
- 本品能穿过胎盘和乳腺屏障，使胎儿更加健康，增加出生体重和断奶体重，降低死亡率；铁是血红蛋白和肌红蛋白的重要组成部分，可有效预防缺铁性贫血及其并发症。
饲料级氨基酸亚铁螯合物的用途及功效
| 应用对象 | 建议剂量 （克/吨全值材料） | 全价饲料中含量（mg/kg） | 功效 |
| 母猪 | 300～800 | 45～120 | 1、提高母猪的繁殖性能和利用寿命； 2、提高仔猪初生重、断奶重和均匀度，提高后期生产性能； 3、提高乳猪铁储存量和奶中铁浓度，预防乳猪缺铁性贫血。 |
| 仔猪和育肥猪 | 仔猪300～600头 | 45～90 | 1、提高仔猪免疫力，增强抗病能力，提高成活率； 2、提高生长速度，提高饲料转化率，提高断奶窝重和整齐度，减少病猪发生率； 3、提高肌红蛋白和肌红蛋白水平，防治缺铁性贫血，使猪皮肤红润，肉色明显改善。 |
| 育肥猪200～400头 | 30～60 | ||
| 鸟 | 300～400 | 45～60 | 1、提高饲料转化率，提高生长速度，提高抗应激能力，降低死亡率； 2、提高产蛋率，减少破蛋率，加深蛋黄颜色； 3、提高种蛋受精率、孵化率和雏禽成活率。 |
| 水生动物 | 200～300 | 30～45 | 1.促进生长，提高饲料转化率； 2、提高抗应激能力，降低发病率和死亡率。 |
3.饲料级氨基酸螯合锌
- 产品名称： 饲料级氨基酸螯合锌
- 外观：棕黄色颗粒
- 理化参数
a) 锌：≥10.0%
b) 氨基酸总量：≥20.5%
c) 螯合率：≥95%
d) 砷：≤2mg/kg
e) 铅：≤5毫克/千克
f) 镉：≤5毫克/千克
g) 水分含量：≤5.0%
h) 细度：颗粒全部通过20目，主要粒径60-80目
n=0,1,2,...表示二肽、三肽和四肽的螯合锌
饲料级氨基酸螯合锌的特性
本产品是以纯植物酶解小分子肽为螯合底物与微量元素，经特殊螯合工艺螯合而成的全有机微量矿物质；
本品化学性质稳定，可显着减少其对维生素、脂肪等的损害。
使用本产品有利于提高饲料品质；产品通过小肽和氨基酸途径吸收，减少了与其他微量元素的竞争和拮抗，具有最佳的生物吸收利用率；
本品可提高免疫力，促进生长，提高饲料转化率，改善皮毛光泽；
锌是200多种酶、上皮组织、核糖和古斯汀的重要组成部分。促进舌粘膜味蕾细胞快速增殖，调节食欲；抑制肠道有害细菌；并具有抗生素作用，能提高消化系统的分泌功能和组织细胞酶的活性。
饲料级氨基酸螯合锌的用途及功效
| 应用对象 | 建议剂量 （克/吨全值材料） | 全价饲料中含量（mg/kg） | 功效 |
| 妊娠母猪和哺乳期母猪 | 300～500 | 45～75 | 1、提高母猪的繁殖性能和利用寿命； 2、提高胎儿和仔猪活力，增强抗病能力，使其后期有更好的生产性能； 3、改善妊娠母猪体质和仔猪初生重。 |
| 乳猪、仔猪及生长育肥猪 | 250～400 | 37.5～60 | 1、提高仔猪免疫力，减少腹泻和死亡率； 2、改善适口性，增加采食量，提高生长速度，提高饲料转化率； 3、使猪毛色光亮，提高胴体品质和肉质。 |
| 鸟 | 300～400 | 45～60 | 1、提高羽毛光泽度； 2、提高种蛋的产蛋率、受精率和孵化率，强化蛋黄着色能力； 3、提高抗应激能力，降低死亡率； 4、提高饲料转化率，提高生长速度。 |
| 水生动物 | 一月 300 | 45 | 1.促进生长，提高饲料转化率； 2、提高抗应激能力，降低发病率和死亡率。 |
| 反刍动物克/头日 | 2.4 | 1、提高产奶量，预防乳腺炎、腐蹄病，降低牛奶中体细胞含量； 2、促进生长，提高饲料转化率，改善肉质。 |
4. 饲料级氨基酸螯合锰
- 产品名称： 饲料级氨基酸螯合锰
- 外观：棕黄色颗粒
- 理化参数
a) 锰：≥10.0%
b) 氨基酸总量：≥19.5%
c) 螯合率：≥95%
d) 砷：≤2mg/kg
e) 铅：≤5毫克/千克
f) 镉：≤5毫克/千克
g) 水分含量：≤5.0%
h) 细度：颗粒全部通过20目，主要粒径60-80目
n=0, 1,2,...表示二肽、三肽和四肽的螯合锰
饲料级氨基酸螯合锰的特性
本产品是以纯植物酶解小分子肽为螯合底物与微量元素，经特殊螯合工艺螯合而成的全有机微量矿物质；
本品化学性质稳定，可显着减少其对维生素、脂肪等的损害，使用本品有利于提高饲料品质；
产品通过小肽和氨基酸途径吸收，减少了与其他微量元素的竞争和拮抗，具有最佳的生物吸收利用率；
该产品能显着提高生长速度、改善饲料转化率和健康状况；明显提高种禽的产蛋率、孵化率和健康雏鸡率；
锰对于骨骼生长和结缔组织维持是必需的。它与许多酶密切相关；并参与碳水化合物、脂肪和蛋白质的代谢、繁殖和免疫反应。
饲料级氨基酸螯合锰的用途及功效
| 应用对象 | 建议用量（克/吨全值料） | 全价饲料中含量（mg/kg） | 功效 |
| 种猪 | 200～300 | 30～45 | 1、促进性器官正常发育，提高精子活力； 2、提高种猪繁殖能力，减少繁殖障碍。 |
| 仔猪和育肥猪 | 100～250 | 15～37.5 | 1、有利于提高免疫功能，提高抗应激能力和抗病能力； 2、促进生长，显着提高饲料转化率； 3、改善肉色和品质，提高瘦肉率。 |
| 鸟 | 250～350 | 37.5～52.5 | 1、提高抗应激能力，降低死亡率； 2、提高种蛋的产蛋率、受精率和孵化率，改善蛋壳质量，减少破壳率； 3、促进骨骼生长，减少腿部疾病的发生。 |
| 水生动物 | 100～200 | 15～30 | 1、促进生长，提高其抗应激能力和抗病能力； 2、提高精子活力和受精卵孵化率。 |
| 反刍动物克/头日 | 牛1.25 | 1、防止脂肪酸合成障碍和骨组织损伤； 2.提高繁殖能力，防止雌性动物流产和产后瘫痪，降低犊牛和羔羊的死亡率， 并增加幼龄动物的新生体重。 | |
| 山羊 0.25 |
第 6 部分 小肽-矿物质螯合物的 FAB
| 序列号 | F：功能属性 | 答：竞争差异 | B：竞争差异给用户带来的好处 |
| 1 | 原料选择性控制 | 精选纯植物酶解小肽 | 生物安全性高，避免同类相食 |
| 2 | 双蛋白生物酶定向消化技术 | 小分子肽比例高 | 更多“靶点”，不易饱和，生物活性高，稳定性更好 |
| 3 | 先进的压力喷雾干燥技术 | 颗粒状产品，粒度均匀，流动性较好，不易吸潮 | 确保使用方便，在全价饲料中混合更均匀 |
| 含水量低（≤5%），大大降低了维生素和酶制剂带来的影响 | 提高饲料产品的稳定性 | ||
| 4 | 先进的生产控制技术 | 全封闭流程，自动控制程度高 | 质量安全稳定 |
| 5 | 先进的质量控制技术 | 建立健全科学先进的酸溶蛋白、分子量分布、氨基酸、螯合率等影响产品质量因素检测的分析方法和控制手段 | 保证质量、保证效率、提高效率 |
第 7 部分 竞争对手比较
标准 VS 标准
产品肽分布及螯合率比较
| 苏星达产品 | 小肽比例（180-500） | 金宝的产品 | 小肽比例（180-500） |
| AA铜 | ≥74% | 阿瓦伊拉铜 | 78% |
| AA铁 | ≥48% | 阿瓦伊拉铁 | 59% |
| AA锰 | ≥33% | 阿瓦伊拉锰 | 53% |
| AA锌 | ≥37% | 阿瓦伊拉锌 | 56% |
| 苏星达产品 | 螯合率 | 金宝的产品 | 螯合率 |
| AA铜 | 94.8% | 阿瓦伊拉铜 | 94.8% |
| AA铁 | 95.3% | 阿瓦伊拉铁 | 93.5% |
| AA锰 | 94.6% | 阿瓦伊拉锰 | 94.6% |
| AA锌 | 97.7% | 阿瓦伊拉锌 | 90.6% |
Sustar的小肽比例略低于Zinpro的产品，Sustar的产品螯合率略高于Zinpro的产品。
不同产品17种氨基酸含量比较
| 姓名 氨基酸 | 苏斯塔的铜 氨基酸螯合物 饲料级 | 金宝的 阿瓦伊拉 铜 | Sustar的亚铁氨基酸C 饲料 年级 | 金宝的 AVAILA 铁 | 苏斯塔锰 氨基酸螯合物 饲料级 | 金宝的 AVAILA 锰 | 苏斯塔锌 氨基酸 螯合物饲料级 | 金宝的 AVAILA 锌 |
| 天冬氨酸(%) | 1.88 | 0.72 | 1.50 | 0.56 | 1.78 | 1.47 | 1.80 | 2.09 |
| 谷氨酸(%) | 4.08 | 6.03 | 4.23 | 5.52 | 4.22 | 5.01 | 4.35 | 3.19 |
| 丝氨酸(%) | 0.86 | 0.41 | 1.08 | 0.19 | 1.05 | 0.91 | 1.03 | 2.81 |
| 组氨酸 (%) | 0.56 | 0.00 | 0.68 | 0.13 | 0.64 | 0.42 | 0.61 | 0.00 |
| 甘氨酸(%) | 1.96 | 4.07 | 1.34 | 2.49 | 1.21 | 0.55 | 1.32 | 2.69 |
| 苏氨酸(%) | 0.81 | 0.00 | 1.16 | 0.00 | 0.88 | 0.59 | 1.24 | 1.11 |
| 精氨酸(%) | 1.05 | 0.78 | 1.05 | 0.29 | 1.43 | 0.54 | 1.20 | 1.89 |
| 丙氨酸(%) | 2.85 | 1.52 | 2.33 | 0.93 | 2.40 | 1.74 | 2.42 | 1.68 |
| 酪氨酸酶(%) | 0.45 | 0.29 | 0.47 | 0.28 | 0.58 | 0.65 | 0.60 | 0.66 |
| 胱氨醇(%) | 0.00 | 0.00 | 0.09 | 0.00 | 0.11 | 0.00 | 0.09 | 0.00 |
| 缬氨酸(%) | 1.45 | 1.14 | 1.31 | 0.42 | 1.20 | 1.03 | 1.32 | 2.62 |
| 蛋氨酸(%) | 0.35 | 0.27 | 0.72 | 0.65 | 0.67 | 0.43 | 一月 0.75 | 0.44 |
| 苯丙氨酸(%) | 0.79 | 0.41 | 0.82 | 0.56 | 0.70 | 1.22 | 0.86 | 1.37 |
| 异亮氨酸(%) | 0.87 | 0.55 | 0.83 | 0.33 | 0.86 | 0.83 | 0.87 | 1.32 |
| 亮氨酸(%) | 2.16 | 0.90 | 2.00 | 1.43 | 1.84 | 3.29 | 2.19 | 2.20 |
| 赖氨酸(%) | 0.67 | 2.67 | 0.62 | 1.65 | 0.81 | 0.29 | 0.79 | 0.62 |
| 脯氨酸(%) | 2.43 | 1.65 | 1.98 | 0.73 | 1.88 | 1.81 | 2.43 | 2.78 |
| 氨基酸总量(%) | 23.2 | 21.4 | 22.2 | 16.1 | 22.3 | 20.8 | 23.9 | 27.5 |
总体而言，Sustar产品中的氨基酸比例高于Zinpro产品中的氨基酸比例。
第 8 部分 使用效果
不同来源的微量矿物质对产蛋后期蛋鸡生产性能和蛋品质的影响
生产流程
- 靶向螯合技术
- 剪切乳化技术
- 压力喷雾干燥技术
- 制冷除湿技术
- 先进的环境控制技术
附录 A：肽相对分子质量分布的测定方法
采用标准：GB/T 22492-2008
1 测试原理：
采用高效凝胶过滤色谱法测定。即以多孔填料为固定相，根据待分离样品成分相对分子质量大小的差异，在紫外吸收波长220nm处检测肽键，采用凝胶过滤色谱法测定相对分子质量分布的专用数据处理软件（即GPC软件），对色谱图及其数据进行处理、计算，得到大豆肽相对分子质量的大小及分布范围。
2. 试剂
实验用水应符合GB/T6682中二次水的规定，所用试剂除特殊规定外，均为分析纯。
2.1 试剂包括乙腈（色谱纯）、三氟乙酸（色谱纯）、
2.2 相对分子质量分布校准曲线所用标准物质：胰岛素、菌肽、甘氨酸-甘氨酸-酪氨酸-精氨酸、甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸
3 仪器设备
3.1 高效液相色谱仪（HPLC）：配有紫外检测器和GPC数据处理软件的色谱工作站或积分仪。
3.2 流动相真空过滤脱气装置。
3.3 电子天平：分度值0.000 1g。
4 操作步骤
4.1 色谱条件及系统适应实验（参考条件）
4.1.1 色谱柱：TSKgelG2000swxl300 mm×7.8 mm（内径）或其他适用于蛋白质、肽测定的同类型、类似性能的凝胶柱。
4.1.2 流动相：乙腈+水+三氟乙酸=20+80+0.1。
4.1.3 检测波长：220 nm。
4.1.4 流速：0.5mL/min。
4.1.5检测时间：30分钟。
4.1.6 进样量：20μL。
4.1.7 柱温：室温。
4.1.8 为使色谱系统满足检测要求，规定在上述色谱条件下，以三肽标准品（甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸）峰计算的凝胶色谱柱效率，即理论塔板数（N）不低于10000。
4.2 相对分子质量标准曲线的制作
将上述质量浓度为1 mg/mL的不同相对分子质量的肽标准溶液通过流动相配比，按一定比例混合，再经孔径为0.2 μm~0.5 μm的有机相膜过滤，注入样品中，得到标准品的色谱图。通过绘制相对分子质量的对数与保留时间的关系或通过线性回归获得相对分子质量校准曲线及其方程。
4.3 样品处理
准确称取样品10mg于10mL容量瓶中，加入少许流动相，超声振荡10min，使样品充分溶解混匀，用流动相稀释至刻度，用孔径为0.2μm~0.5μm的有机相滤膜过滤，滤液按A.4.1中色谱条件进行分析。
5. 相对分子质量分布的计算
将4.3制备的样品溶液在4.1的色谱条件下分析后，用GPC数据处理软件将样品的色谱数据代入校准曲线4.2即可得到样品的相对分子质量及其分布范围。不同肽的相对分子质量分布可通过峰面积归一化法计算，根据公式：X=A/A总×100
式中：X——样品中某相对分子质量肽占总肽的质量分数，%；
A——相对分子质量肽的峰面积；
总 A - 每个相对分子质量肽的峰面积总和，计算到小数点后一位。
6 重复性
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过两次测定算术平均值的15%。
附录 B：游离氨基酸的测定方法
采用标准：Q/320205 KAVN05-2016
1.2 试剂和材料
冰醋酸：分析纯
高氯酸：0.0500mol/L
指示剂：0.1%结晶紫指示剂（冰醋酸）
2. 游离氨基酸的测定
将样品在 80°C 下干燥 1 小时。
将样品置于干燥容器中自然冷却至室温或冷却至可用温度。
称取约 0.1 g 样品（精确至 0.001 g）放入 250 mL 干燥锥形瓶中。
快速进行下一步，避免样品吸收环境水分
添加 25 mL 冰醋酸并充分混合不超过 5 分钟。
添加2滴结晶紫指示剂
用0.0500 mol/L（±0.001）高氯酸标准滴定溶液滴定至溶液由紫色变为终点。
记录消耗的标准溶液的体积。
同时进行空白试验。
3 计算及结果
试剂中游离氨基酸含量X以质量分数（%）表示，按下式计算：X=C×（V1-V0）×0.1445/M×100%，式中：
C——高氯酸标准溶液的浓度，单位为摩尔每升（mol/L）
V1——用标准高氯酸溶液滴定样品所用的体积，单位为毫升（mL）。
Vo——用标准高氯酸溶液滴定空白所用的体积，单位为毫升（mL）；
M——样品的质量，单位为克（g）。
0.1445：相当于1.00mL高氯酸标准溶液的氨基酸平均质量[c(HClO4)=1.000mol/L]。
附录C：Sustar螯合率的测定方法
采用标准：Q/70920556 71-2024
1、判定原理（以Fe为例）
氨基酸铁配合物在无水乙醇中的溶解度很低，游离金属离子可溶于无水乙醇，利用两者在无水乙醇中溶解度的差异来测定氨基酸铁配合物的螯合率。
2. 试剂及溶液
无水乙醇；其余同GB/T 27983-2011中4.5.2。
三、分析步骤
并行进行两个试验。称取 103±2℃干燥 1 小时的样品 0.1g，精确至 0.0001g，加 100mL 无水乙醇溶解，过滤，滤渣用 100mL 无水乙醇洗涤至少 3 次，然后将残渣转移至 250mL 锥形瓶中，按 4.5.3 条加入 10mL 硫酸溶液。 GB/T27983-2011，然后按GB/T27983-2011中4.5.3“加热溶解，然后冷却”进行以下步骤。同时进行空白试验。
4、总铁含量的测定
4.1 判定原则同GB/T 21996-2008中4.4.1。
4.2.试剂和溶液
4.2.1 混酸:将150mL硫酸和150mL磷酸加入到700mL水中,混匀。
4.2.2 二苯胺磺酸钠指示液：5g/L，按GB/T603配制。
4.2.3 硫酸铈标准滴定溶液:浓度c[Ce(SO4)2]=0.1mol/L,按GB/T601配制。
4.3 分析步骤
并行进行两个试验。称取试样0.1g，精确至020001g，置于250mL锥形瓶中，加10mL混合酸，溶解后，加30ml水和4滴二苯胺磺酸钠指示液，按GB/T21996-2008中4.4.2进行。同时进行空白试验。
4.4 结果的表示
氨基酸铁配合物的总铁含量X1以铁的质量分数表示，数值以%表示，按下式（1）计算：
X1=(V-V0)×C×M×10-3×100
式中：V——滴定试液所消耗的硫酸铈标准溶液的体积，mL；
V0——滴定空白溶液消耗的硫酸铈标准溶液，mL；
C——硫酸铈标准溶液的实际浓度，mol/L
5. 螯合物中铁含量的计算
螯合物中铁的含量X2以铁的质量分数表示，数值以％表示，按下式计算：x2=((V1-V2)×C×0.05585)/m1×100
式中：V1——滴定试液所消耗的硫酸铈标准溶液的体积，mL；
V2——滴定空白溶液消耗的硫酸铈标准溶液，mL；
C——硫酸铈标准溶液的实际浓度，mol/L；
0.05585——二价铁的质量，以克表示，相当于1.00 mL硫酸铈标准溶液C[Ce(SO4)2.4H20] = 1.000 mol/L。
m1-样品的质量，g。以平行测定结果的算术平均值作为测定结果，平行测定结果的绝对差值不大于0.3%。
6. 螯合率的计算
螯合率X3，数值以%表示，X3=X2/X1×100
附录 C：金宝螯合率的测定方法
采用标准：Q/320205 KAVNO7-2016
1. 试剂与材料
a) 冰醋酸：分析纯； b) 高氯酸：0.0500mol/L； c) 指示剂：0.1%结晶紫指示剂（冰醋酸）
2. 游离氨基酸的测定
2.1 将样品在80℃下干燥1小时。
2.2 将样品置于干燥容器中自然冷却至室温或冷却至可用温度。
2.3 称取约 0.1 g 样品（精确至 0.001 g）放入 250 mL 干燥锥形烧瓶中
2.4 快速进行下一步，避免样品吸收环境水分。
2.5 加入25mL冰醋酸，混匀不超过5min。
2.6 添加2滴结晶紫指示剂。
2.7 用0.0500mol/L(±0.001)高氯酸标准滴定溶液滴定至溶液由紫色变为绿色15s不变色为终点。
2.8 记录消耗标准溶液的体积。
2.9 同时进行空白试验。
3 计算及结果
试剂中游离氨基酸含量X以质量分数（%）表示，按式（1）计算：X=C×（V1-V0）×0.1445/M×100%............（1）
式中：C——高氯酸标准溶液的浓度，单位为摩尔每升（mol/L）
V1——用标准高氯酸溶液滴定样品所用的体积，单位为毫升（mL）。
Vo——用标准高氯酸溶液滴定空白所用的体积，单位为毫升（mL）；
M——样品的质量，单位为克（g）。
0.1445——相当于1.00mL高氯酸标准溶液的氨基酸平均质量[c(HClO4)=1.000mol/L]。
4. 螯合率的计算
样品的螯合率以质量分数（%）表示，按式（2）计算：螯合率=（总氨基酸含量-游离氨基酸含量）/总氨基酸含量×100%。
发布时间：2025年9月17日
